| 本试剂盒仅供科研使用 铁含量（亚铁嗪比色法）检测试剂盒说明书 （货号：WS2121F 分光法 48 样） 一、产品简介： 在酸性介质中铁从复合物中解离出来，再被还原剂还原成二价铁，并与亚铁嗪生成紫 红色化合物，该有色物质在 562nm 处有特征吸收峰，进而计算得出铁含量。适用于检测 组织、血清等样品中的铁含量。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 瓶 4℃保存 试剂一 液体 26mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 粉体×2 支 4℃保存 用甩几下或离心使粉体落入底部，每支 再加入 1.2mL 的蒸馏水溶解备用。 试剂三 液体 2mL×1 支 4℃保存 标准品 液体 1mL×1 支 4℃保存 临用用试剂三稀释 50 倍(即取 10μL 的 标准品至 EP管中，再加 490μL的试剂三)， 制备成 2μg/mL 的铁标准品。 三、所需仪器和用品： 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、可调式移液器、离心机、蒸馏水。 四、铁含量检测： 建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实 验样本和试剂浪费！ 1、 样本制备： ① 组织样本： 取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离心 5min，取上 清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。 ② 细菌/细胞样本： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液(mL)为 500~1000：1 的比例进行提取。 ③ 液体样本：澄清的液体可直接检测；若浑浊则离心后取上清液检测。 2、上机检测： ①可见分光光度计预热 30min，设定波长到 562nm，蒸馏水调零。 ②所有试剂解冻至室温，在 EP 管中依次加入：本试剂盒仅供科研使用 2 【注】：若 A 测定管大于 0.8，可用蒸馏水对样本上清液进行稀释，稀释倍数 D 代入计算公式。 五、结果计算： 1、按照组织质量计算： 铁含量(μg/g)=(C 标准×V1)×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(V1÷V×W)×D =2×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷W×D 铁含量(nmol/g)= (C 标准×V1)×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(V1÷V×W)×103÷Mr×D =35.81×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷W×D 2、按细胞数量计算： 铁含量(μg/104 cell)=(C 标准×V1)×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(V1÷V×细胞数量)×D =2×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷细胞数量×D 铁含量(nmol/104 cell)=(C 标准×V1)×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(V1÷V×细胞 数量)×103÷Mr×D =35.81×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷细胞数量×D 3、按照液体体积计算： 铁含量(μg/mL)=(C 标准×V1)×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V1×D =2×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D 铁含量(μmol/L)=(C 标准×V1)×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V1×103÷Mr×D =35.81×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D C 标准－－-铁标品浓度，2μg/mL； V1－－-加入样本体积，0.24mL； V－－-提取液体积，1mL； W－－-样本取样质量，g； D－－-稀释倍数，未稀释即为 1； Mr－－-铁分子量，55.847。 试剂名称（μL） 测定管 标准管 （仅做一次） 空白管 （仅做一次） 样本 240 标准品 240 蒸馏水 240 试剂一 520 520 520 试剂二 40 40 40 充分混匀，置室温 15min 后，若浑浊则需 3000rpm 离心 5min 后取 全部上清液至 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中，于波长 562nm 处 读取各管吸光度 A。 原创作者：上海瓦兰生物科技有限公司 |
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