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技术文章

    人乳头状瘤病毒16型IgG抗体(HPV16 IgG Ab)试剂盒(ELISA) #台风资讯

    阅读次数:172  发布时间:2022/4/25 10:33:05
     本试剂盒用于体外定性检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本人乳头状瘤病毒16型IgG抗体HPV16 IgG Ab)。

    有效期:6个月

    保存条件:2-8℃

     

     

    实验原理

    试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人乳头状瘤病毒16型IgG抗体(HPV16 IgG Ab)捕获抗原的包被微孔中,依次加入标本、阴性和阳性对照,再加入HRP标记的检测抗体,经过温育并彻di洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人乳头状瘤病毒16型IgG抗体(HPV16 IgG Ab)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),判定阴阳性。

     

    样本处理及要求

    1.  血清将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20-80保存,但应避免反复冻融。
    2.  血浆EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20-80保存,但应避免反复冻融。
    3.  组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mLPBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。zui后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

    4.  细胞培养物上清或其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

    注:标本溶血会影响zui后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

     

    需要而未提供的试剂和器材

    1. 酶标仪(450nm

    2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL

    3. 37℃恒温箱

    4. 蒸馏水或去离子水

     

    试剂盒组成

     

    名称

    96孔配置

    48孔配置

    备注

    微孔酶标板

    96

    48

    阴性对照

    0.3mL

    0.3mL

    阳性对照

    0.3mL

    0.3mL

    样本稀释液

    6mL

    3mL

    检测抗体-HRP

    10mL

    5mL

    20×洗涤缓冲液

    25mL

    15mL

    按说明书进行稀释

    底物A

    6mL

    3mL

    底物B

    6mL

    3mL

    终止液

    6mL

    3mL

    封板膜

    2

    2

    说明书

    1

    1

    自封袋

    1

    1

     

    注意事项

    1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以bao证准确结果。所有试剂都必须在使用达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

    2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

    3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

    4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。

    5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

    6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

    7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

    8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

    9. 不能使用过期产品。

    10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置

     

    试剂准备

    试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

    2洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按120稀释,即120×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

     

    操作步骤

    1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃

    2.  设置阴性对照、阳性对照孔和样本孔,阴性、阳新对照孔各加50μL对照品,样本孔待测样本50μL空白孔不加。

    3.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min

    4.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液350μL,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

    5.  每孔加入底物AB50μL37℃避光孵育15min

    6.  每孔加入终止液50μL15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

     

    实验结果计算

    1. 阴性对照OD值:小于0.2

    2. 阳性对照OD值:大于0.8

    3、阳性判断(Cut-Off值):阴性对照OD+0.25,样本OD值大于阈值,判定为阳性,反之,为阴性。

    4、重复性:板内变异系数小于15%

    5、储藏:2-8℃避光密封保存。

    原创作者:上海瓦兰生物科技有限公司


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