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产品名称:

线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶(mt-GPD)活性试剂盒微板法

产品型号: 96T
产品产地: 中国大陆
访问次数: 152
发布时间: 2023/11/29 10:34:33
我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多,质量好,灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。
可以代检测(为您节省时间)
具体价格请lai电咨询
 
本试剂盒仅供科研使用
线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶(mt-GPD)活性测定试剂盒说明书
(货号:WS7190W 微板法 96 样)
一、产品简介:
线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶(mt-GPD)存在于线粒体中,在 3-磷酸甘油途径中起重要
作用,催化底物 3-磷酸甘油生成磷酸二羟丙酮,同时生成的电子和氢进入呼吸链参与氧
化磷酸化;在电子传递体(PMS)存在下,使噻唑蓝(MTT)还原生成蓝色产物,通过
检测该蓝色产物在 550nm 处的增加速率,即可得出 mt-GPD 活性大小。
二、试剂盒组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 100mL×1
4℃保存
试剂二
液体 20mL×1
4℃保存
试剂三
液体 0.2mL×1
4℃保存
试剂四
粉剂 mg×2
4℃保存
用甩几下使试剂落入底部,
每支加 0.6mL 的蒸馏水溶解。
一周内用完。
试剂五
粉剂 mg×4
-20℃保存
用甩几下使试剂落入底部,
每支加 0.3mL 的蒸馏水溶解。
一天内用完。
试剂六
液体 17mL×1
4℃保存
试剂七
粉剂 mg×1
4℃保存
用甩几下使试剂落入底部,
临用加 1.1mL 蒸馏水溶解。
三、所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、可调试移液器、台式离心机、水浴锅、研钵、冰和蒸馏水。
四、线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶(mtGPD)活性测定:
建议正式实验选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、线粒体制备(提示:整个线粒体的提取过程须保持 4℃低温环境):
① 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细菌/细胞,加入 1mL 试剂一,用冰浴匀浆器或研钵匀
浆,转移至离心管后于 4×700g 离心 10min
② 弃沉淀,上清液移至另一离心管中,4×12000g 离心 10min。用移液器移除上清液(
清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的酶活性(此步可选做)),留下沉淀
(沉淀即为线粒体)。
③ 在沉淀(线粒体)中加入200μL试剂二和2μL试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或
200W,超声3s,间隔10,重复30次),液体置于冰上用于线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶
mtGPD活性测定
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取,或按照
细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。
2、上机检测
① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 550nm
② 在 96 孔板中依次加入下列试剂:本试剂盒仅供科研使用
2
试剂名称(μL
测定管
样本
20
试剂四
10
试剂五
10
试剂六
150
试剂七
10
混匀后立即在 550nm 处读取 A1 值,5min 后读取 A2
ΔA=A2-A1
【注】:加完试剂四即启动反应,所以试剂四加完需立即检测,若ΔA 小于 0.05
则增加样本上样量 V1,试剂三相应减少保持原体系不变(如样本上样量为
40μL ,试剂三为 130μL)。则改变后的 V1 需带入计算公式重新计算。
五、结果计算:
1、 按样本蛋白浓度计算
酶活定义:每毫克组织蛋白每分钟还原 1 nmol 噻唑蓝(MTT)定义为一个酶活性单位。
mtGPD 活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷(V1×Cpr) ÷T=493.8×ΔA÷Cpr
2、 按样本鲜重计算
酶活定义:每克组织每分钟还原 1 nmol 噻唑蓝(MTT)定义为一个酶活性单位。
mtGPD 活性(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷(W×V1÷V)÷T=99.8×ΔA÷W
3、 按细菌或细胞密度计算
酶活定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟还原 1 nmol 噻唑蓝(MTT)定义为一个酶活单位。
mtGPD 活性(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.2×ΔA
ε---还原型 MTT 的摩尔消光系数,8.1×103 L/mol/cm
d---96 孔板光径,0.5cm
V---加入提取液体积,0.202mL
V1---加入样本体积,0.02 mL
V2---反应体系总体积,2×10-4 L
T---反应时间,5min
W---样本质量,g
500---细菌或细胞总数,500 万;
Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

更新时间:2024/3/6 9:33:21


标签:线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶(mt-GPD)活性试剂盒   


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