| 本试剂盒仅供科研使用 钙含量（邻甲酚酞络合铜比色法）检测试剂盒说明书 （货号：WS8121W 微板法 96 样） 一、产品简介： 钙(Calcium)是一种金属元素，常温下呈银白色晶体，动物的骨骼、蛤壳、蛋壳都含 有碳酸钙。检测生命体钙含量，主要通过检测钙离子浓度实现的。 本试剂盒利用溶液中钙离子在碱性条件下能与邻甲酚酞络合铜(OCPC)结合，生成紫 红色的络合物，加入镁离子螯合剂，去除镁离子背景干扰。通过检测生成有色络合物于 575nm 处的吸光值，即可计算出总钙含量。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 11mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 液体 11mL×1 瓶 4℃保存 标准品 液体 1mL×1 支 4℃保存 2.5mmol/L 的钙标准品。 三、所需仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、可调式移液器、离心机、蒸馏水（无钙离子）。 四、钙含量检测： 建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、 样本制备： ① 液体样品：澄清的液体样本如血清可直接检测。 ② 组织样本：取约 0.1g 组织样本，加 1mL 生理盐水研磨，粗提液全部转移到 EP 管中， 12000rpm，常温离心 10min，上清液待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。 ③ 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或 细胞加入 1mL 生理盐水，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间 隔 10s，重复 30 次）；12000rpm 离心 10min，取上清待测。 【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min，设定波长到 575nm。 ② 所有试剂解冻至室温，按照试剂一：试剂二为 1:1 配制反应 mix（4℃避光保存三天）。 ③ 在 96 孔板中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 标准管 （仅测一次） 空白管 （仅测一次） 样本 5 标准品 5 蒸馏水 5 反应 mix 200 200 200本试剂盒仅供科研使用 2 【注】：1. 测定管的 A 值若超过 1，可把样本用蒸馏水稀释后测定，稀释倍数 D 代入计算公式。 2. 若 A 测定值接近 A 空白值，则可以增加样本加样体积 V1（如增至 25μL，则反应 mix 减 为 180μL；标准管仍为 5μL，蒸馏水 20μL，反应 mix 为 180μL；空白管为蒸馏水 25μL， 反应 mix 为 180μL），则改变后的 V1 需带入公式计算。 五、结果计算： 1.按液体体积计算： 钙含量(mmol/L)=(C 标准×V 标)×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V1×D =2.5×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D 2.按样本质量计算： 钙含量(μmol/g)=(C 标准×V 标)×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V)×D =2.5×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷W×D 3、按细胞数量计算： 钙含量(nmol/104 cell)=(C 标准×V 标) ×103×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V)×D =5×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白)×D C 标准－－-钙标品浓度，2.5mmol/L=2.5μmol/mL； V 标－－-标准品加入体积，0.005mL； D－－-稀释倍数，未稀释即为 1； V1－－-加入样本体积，0.005mL； V－－-提取液体积，1mL； W－－-取样质量，g； 500－－-细胞数量，万。 混匀，室温放置 2min，于波长 575nm 处读取各管吸光度 A。 更新时间：2024/1/12 8:34:01
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