NME1慢病毒
慢病毒感染快速指南
1. 将目的细胞按 30%汇合度接种到 24 孔板,约 3-5×104细胞数/孔,不同细胞因为细胞大
小不同细胞数量会不同,快速指南以细胞数量为 5×104为例,加入 500uL 完全培养基进行
细胞培养。
2. 接种后 12-20h 感染阴性对照慢病毒(接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长,否则细胞
增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选)。
3.加病毒量计算方法:(细胞数×MOI 值/病毒滴度)×103=病毒量(uL),加病毒量见下表。
同时加入 Polybrene,每孔加 0.25uL,浓度为 10mg/mL Polybrene,细胞培养液中终浓度为
5ug/mL。
病毒液滴度
(TU/mL)
MOI=10
(uL)
MOI=20
(uL)
MOI=40
(uL)
MOI=80
(uL)
MOI=100
(uL)
4×108TU/mL
1.25uL
2.5uL
5uL
10uL
12.5ul
4.感染 16-20h 后更换培养基,弃去培养基,每孔加入 500uL 新鲜的培养基。
5.感染后 48-96h 显微镜观察荧光。(注:如果 48h-96h 期间细胞汇合度达到 100%,请及时
传代培养)
6.建议将 48 孔板细胞进行传代,传代 12 孔板,后继续观察荧光,根据细胞状态和荧光细
胞比例综合判断细胞感染佳 MOI 值。一般选择细胞生长良好,感染效率 80%左右的感染
条件作为佳感染条件。(注:100%荧光感染不一定为细胞佳 MOI 值,因为可能会造成
细胞慢病毒感染拷贝数太高,影响细胞状态)